1. 原理及用途

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法来检测组织、蜂蜜、鸡蛋等样本中的四环素类药物（Tetracyclines，TCs）。试剂盒包括预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂。在检测过程中，添加标准品或样品溶液后，样本中的四环素类药物会与酶标板上预包被偶联抗原竞争抗四环素类药物抗体，随后加入酶标记物，使用TMB底物进行显色。样本吸光度值与四环素类药物含量呈负相关，通过与标准曲线对比可以得出样本中四环素类药物的残留量。

2. 技术指标

2.1 检测灵敏度

灵敏度：0.05 ppb (ng/ml)

2.2 反应条件

反应模式：37℃，30分钟～30分钟～15分钟

2.3 检测下限

组织、肝脏、鸡蛋：2 ppb
蜂蜜：2 ppb
尿样：0.5 ppb
牛奶：2 ppb
奶粉：4 ppb

2.4 交叉反应率

四环素：100%
强力霉素：70%
金霉素：10%
土霉素：10%

2.5 样本回收率

组织：85±20%
肝脏、鸡蛋：75±20%
蜂蜜：85±20%
尿样：80±20%
牛奶、奶粉：75±20%

3. 试剂盒组成

酶标板：96孔
高浓度标准品溶液1瓶：（1ml/瓶）100 ppb（高标准液有挥发性，需注意密封）
标准品溶液0 ppb、0.05 ppb、0.1 ppb、0.2 ppb、0.4 ppb、0.8 ppb（均为空瓶，现配现用）
酶标记物（红盖）：11ml
抗体工作液（蓝盖）：55ml
底物液A（白盖）：6ml
底物液B（黑盖）：6ml
终止液（黄盖）：6ml
20×浓缩洗涤液（白盖）：40ml
5×复溶液（黄盖）：50ml
说明书：1份
盖板膜：1张
自封袋：1个

4. 需要的器材和试剂

4.1 仪器

酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器

单道20µl-200µl，100µl-1000µl，多道300µl

4.3 试剂

浓盐酸、无水甲醇

5. 样本前处理

5.1 样本处理前须知

实验器具必须洁净，并采用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液

配液1：复溶液将5×复溶液用去离子水5倍稀释，以用于样本复溶，复溶液在4℃环境下可保存一个月。

配液2：工作洗涤液将浓缩洗涤液20倍稀释。

配液3：样本提取液取4.3mL浓盐酸加去离子水混匀，定容至50mL，再加入450mL无水甲醇。

5.3 样本前处理步骤

5.3.1 组织、肝脏、鸡蛋样本处理方法

准确称取1±0.005g均质后的样本于离心管中，加入2ml样本提取液，剧烈振荡2分钟，随后进行离心处理。

5.3.2 蜂蜜样本处理方法

准确称取1±0.005g蜂蜜样本，加入1ml样本提取液，振荡混匀2分钟。

5.3.3 尿样本处理方法

尿样用复溶液10倍稀释，若尿样浑浊需过滤或离心。

5.3.4 牛奶样本处理方法

准确吸取1ml牛奶，加入2ml样本提取液，振荡2分钟，检测后进行离心。

5.3.5 奶粉样本处理方法

准确称取1±0.005g奶粉，加入4ml样本提取液，振荡2分钟，检测后进行离心。

6. 酶联免疫试验步骤

将所需试剂从冷藏状态取出，平衡至室温后使用。每种液体试剂使用前需充分摇匀，然后进行加样与反应步骤，以确保准确性。在执行ELISA实验时，确保所有步骤遵循标准操作流程，以获得可靠的检测结果。

7. 结果分析

7.1 百分吸光率的计算

使用标准液或样本的平均吸光度计算百分吸光率。

7.2 标准曲线的绘制与计算

根据标准液的百分吸光率，绘制半对数曲线，结合样本的结果计算实际浓度。

8. 注意事项

在实验过程中注意环境温度、样本处理和试剂使用，确保试剂的新鲜和有效性，以获取可靠的数据。

9. 贮藏及保存期

试剂盒应在2-8℃下保存，避免冷冻，产品有效期为1年。

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