产品与特点

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理推出的检测试剂盒，具备以下特点：

1. 即开即用

用户仅需提供样品DNA模板，无需额外准备。

2. 高灵敏度

引物及其它组分经过优化，确保高灵敏度的检测效果。

3. 阳性对照提供

盒内附有阳性对照，便于用户识别假阴性样品。

4. 高特异性

引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，避免与其它生物样品DNA发生交叉反应。

5. 双重检测能力

本试剂盒不仅适用于定性检测，还支持定量检测，线性范围至少扩展至5个数量级。

6. 足量组成

本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 科研专用

本试剂盒仅供科研用途，不得用于临床诊断。

实验步骤

一、DNA提取

采用自选方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

由于阳性对照浓度较高，以下稀释操作须在独立区域内进行，以避免污染样品或其他试剂成分：

1. 标记六个离心管，分别记为7，6，5，4，3，2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，待用。
4. 同样方法依次制备6号至2号管，得到不同浓度的标准曲线样品。

三、试剂配制

准备N个待测样品所需的qPCR管（N为样品数量+1个阴性对照+6个阳性对照），向每个PCR管中加入相应成分（详见说明书）。

四、添加模板

每管加入2μL模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品和阳性对照，随后离心30秒并立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放入PCR扩增仪器中进行扩增，具体程序请参见说明书。

六、结果分析

若制作标准曲线，依据阳性对照浓度的log值和Ct值绘制标准曲线。若未制作标准曲线，按照以下标准判定结果：

1. 阳性对照：Ct值<30，明显指数增长，呈现典型S型曲线。
2. 阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长或平台期。
3. 样本检测：Ct值<35，表明检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值，结果为阴性；Ct值在35-38范围内需重复检测。

储存与运输

产品需低温运输，并在-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需单独存放，防止污染其他试剂。

本产品由尊龙凯时出品，致力于提供精准、高效的生物医疗解决方案。选择尊龙凯时，让您的科研更加顺利。